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(資料圖片僅供參考)
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日，
中國科學院北京生科院孫中生團隊、溫州醫(yī)科大學、首都兒科研究所合作，在 Advanced Science 上， 在線發(fā)表了 題為
Loss-of-Function of p21-Activated Kinase 2 Links BMP Signaling to Neural Tube Patterning Defects
的研究論文。該研究聚焦神經(jīng)管畸形的致病機制，綜合運用神經(jīng)生物學、人類遺傳學、多組學等技術手段，在多種模式生物中揭示了
PAK2
調(diào)節(jié)背外側鉸鏈點形成和神經(jīng)管發(fā)育及其功能異常所致神經(jīng)管畸形的致病機理，為探究神經(jīng)管畸形的病理機制提供了嶄新視角。
神經(jīng)管是中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的基礎，在胚胎后期發(fā)育成腦和脊柱。在脊椎動物中，神經(jīng)管閉合是高度復雜的動態(tài)調(diào)控過程，涉及許多由遺傳和表觀遺傳因素精確控制的細胞事件。神經(jīng)管閉合異常會導致神經(jīng)管畸形。神經(jīng)管畸形致死率和致畸率較高，給患者家庭帶來沉重的經(jīng)濟與精神負擔。神經(jīng)管畸形
是胎兒和新生兒中最嚴重的出生缺陷類疾病之一。
PAK 家族是一類可以調(diào)控細胞骨架的蛋白激酶。該團隊的前期研究確定了 PAK2 在腦發(fā)育中的重要功能，并闡明了 PAK2 在自閉癥發(fā)病中的分子機制（ Wang et al., 2018 ）。本研究發(fā)現(xiàn) Pak2 純和缺失小鼠在胚胎期 9.5 天時發(fā)育遲緩，表現(xiàn)出顱脊柱裂的表型。進一步研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎期 9.5 天時， Pak2 純和缺失小鼠未能在后腦和脊柱部位抬起雙側神經(jīng)板，導致背外側鉸鏈點形成失敗。這提示 PAK2 基因?qū)τ谡麄€頭尾胚軸的背外側彎曲是必要的。研究通過分析胚胎期 9.5 天的轉錄組發(fā)現(xiàn)， Pak2 純和缺失小鼠的差異表達基因顯著富集到初級神經(jīng)管形成、前腦、中腦、后腦發(fā)育、模式特化過程和脊柱發(fā)育過程。這些差異表達基因還顯著地富集于 BMP 信號通路。 BMP 信號通路的多個配體，如 BMP4/5 和下游 Smad9 的磷酸化水平，均在 Pak2 純和缺失小鼠中顯著增加?？蒲袌F隊進一步將 Smad9 蛋白 417 位點絲氨酸突變后可減弱 PAK2 和 Smad9 蛋白的相互作用，并解除 PAK2 對 Smad9 蛋白 465 位點絲氨酸磷酸化的抑制。上述工作提示 PAK2 可通過調(diào)控 Smad9 蛋白的磷酸化水平，從而抑制 BMP 信號通路，促使雙側神經(jīng)板的抬起和神經(jīng)管背外側鉸鏈點形成。 ?
單細胞測序技術進一步顯示， Pak2 純和缺失后可影響中胚層細胞向神經(jīng)管及前腦和脊柱的分化軌跡，使得與神經(jīng)管和神經(jīng)管發(fā)育而成的前腦、后腦、脊柱等相關的細胞類型顯著下降。與野生型胚胎相比， Pak2 純和缺失胚胎的神經(jīng)管發(fā)育分數(shù)及前腦（尤其是間腦部分）發(fā)育分數(shù)降低。同時， BMP 信號通路及該信號通路中的基因表達在 Pak2 純和缺失胚胎中增加。這提示 Pak2 純和缺失胚胎中異常的分化時序與異常的轉錄狀態(tài)相關。 ?
該團隊在流產(chǎn)的神經(jīng)管畸形胎兒中檢測到 5 個位于 PAK2 基因的點突變。研究運用 NanoString 檢測方法，發(fā)現(xiàn)攜帶 PAK2 突變的胎兒腦組織中 PAK2 的水平降低而 BMP 信號通路中多個基因的水平增加。同時，研究發(fā)現(xiàn) PAK2 突變點可影響 PAK2 蛋白的穩(wěn)定性，抑制 ATP 轉化 ADP 的水平，顯著降低 PAK2 的活性形式 pPAK2 的水平，提示該突變位點影響 PAK2 激酶活性。 ?
研究在斑馬魚中用 CRISPR-Cas9 系統(tǒng) 構建了 pak2a 的特異敲除模型。該模型在出生后 48 小時后在頭部背前側區(qū)域出現(xiàn)了一個明顯的空腔，提示其神經(jīng)管發(fā)育異常。研究在敲除 pak2a 的斑馬魚中過表達神經(jīng)管畸形患者攜帶的 PAK2 突變位點，發(fā)現(xiàn)不能改善斑馬魚神經(jīng)管畸形的表型。 ?
綜上，該研究以神經(jīng)管特定發(fā)育事件（背外側鉸鏈點形成）為出發(fā)點、從細胞動態(tài)時序發(fā)育過程（單細胞測序技術）、分子機制（磷酸化激酶活性）和信號通路（ BMP 通路）等多水平，在多種脊椎類生物中闡明了 PAK2 在神經(jīng)管發(fā)育的作用機制。 ?
研究工作得到國家自然科學基金和廣東省重點領域研發(fā)計劃等的支持。 ?
論文鏈接
圖1. Pak2 純和缺失胚胎中異常的分化時序 ?
圖 2 . PAK2 在神經(jīng)管發(fā)育的作用機制 ?
標簽： 神經(jīng)管畸形 差異表達 突變位點 作用機制
